挪威黄金枫和自由人槭组织培养获得无菌试管苗的研究

槭树植物是槭树属(Acer)的泛称，其木材质地坚硬，材质细密，是良好的家具、农具、枕木及建筑用材，树冠冠幅较大，树姿优美，叶形秀丽，秋季树叶渐变为红色或黄色，为著名的秋色叶树种，是理想的行道树或城市绿化庭园树种，在各地风景园林中得到普遍应用。挪威黄金枫(AcerplatanoidesLinnd)和自由人槭(Acerreema-niiAutumnBlaze)是由北美引进的槭树中的经典品种，该试验介绍这2种槭树组织培养初代培养的研究，有效的获得了2种槭树的无菌试管苗，为这2种槭树的组织培养快繁技术研究提供了参考。

1材料与方法

选取饱满的挪威黄金枫种子和自由人槭顶芽、幼嫩茎段，用清水冲洗2～3h，在超净工作台上，去除挪威黄金枫种子外种皮，剪取自由人槭顶芽和幼嫩茎段75%酒精浸润30s，无菌水冲洗2～3次，0.1%升汞消毒4～12mb清水冲洗3～4次接种于添加2种不同植物生长调节剂的2种不同培养基中(培养基添加蔗糖30g/L、琼脂6g/L,pH调至5.8，选用正交试验表L4(23)和L8(27)，试验因素和水平见表1），放置在温度22～28℃，光照条件分别为3000～5000lx光照和黑暗的环境中培养，重复3次1周后统计无菌率，2周后，去除污染中毒的统计萌发率，4周后统计萌发芽的成苗率。

2结果与分析

2.1升汞不同消毒时间对无菌率和中毒率的影响

从表2中得出，挪威黄金枫以种子为外植体，升汞消毒时间在8min以上日寸，无菌率达100%,但中毒率随着消毒时间的增加而增高，升汞消毒时间在8min以下时，无中毒现象，但无菌率随着时间的减少而降低，升汞消毒时间在8min时无菌率最高，中毒率最低，得出挪威黄金枫以种子为外植体，升汞消毒时间在8min,消毒效果最佳。

自由人槭以顶芽为外植体随着升汞消毒时间的增加，无菌率也随着增加，消毒时间在6min以下，中毒率为0，说明随着升汞消毒时间的增加杂菌被杀死的比率在升高，但消毒时间过长，顶芽的细胞和组织发生了严重的中毒现象，升汞消毒时间在6min时，无菌率最高中毒率最低，得出自由人槭以顶芽为外植体，升汞消毒6min消毒效果最佳；自由人槭以幼嫩茎段为外植体日寸，升汞消毒时间较顶芽时间要长，原因是茎段较顶芽木质化程度高，茎段的细胞和组织较耐杀毒且所含的杂菌多，综合各因素得出，自由人槭以细嫩茎段外植体时，升汞消毒10min,消毒效果最佳。

2.2不同温度和光照条件对萌发率的影响

由表3得出，挪威黄金枫种子在黑暗条件下，平均萌发率为95.67%，在光照3000～5000lx平均萌发率为91.67%，当温度在24～26℃时，平均萌发率最高达到96.25%，表明挪威黄金枫种子在黑暗条件下，更有利于种子的萌发，温度在24～26℃时，适于种子的萌发。同样，由表3数据得出，自由人槭的顶芽和幼嫩茎段在黑暗条件和有光条件下平均萌发率很接近但在黑暗条件下，顶芽和幼嫩茎段萌发出的芽弱。自由人槭以顶芽为外植体萌发率明显高于以幼嫩茎段为外植体，原因是顶芽具有顶端优势，萌动能力强。温度在24～26℃时，自由人槭以顶芽和幼嫩茎段平均萌发率最高。综合各因素得出，自由人槭以顶芽为外植体更有利于芽的萌发，温度在24～26℃光照条件下为最适的培养温度。

2.3不同培养基和外植体对成苗率的影响

2.3.1不同培养基类型和激素浓度对挪威黄金枫种子成苗率的影响4周后，新芽长出2片子叶，高在1cm以上时，统计挪威黄金枫种子和自由人槭不同外植体成苗率。由表4得出，外植体在MS培养基中的平均成苗率最高达96.5%，细胞分裂素BA为0.5mg/L时，平均成苗率最高达96%，生长素NAA为0.2mg/L时，平均成苗率为95%，略高于生长素为0.1mg/L时的成苗率0综合3个因素得出，选用MS培养基添加0.5m/L的6～BA和0.2mg/L的NAA有利于挪威黄金枫种子的成苗。

2.3.2不同培养基类型、激素浓度和外植体对自由人槭成苗率影响由表5得出，自由人槭以顶芽为外植体时平均成苗率最高达97.5%在MS培养基中平均成苗率最高达96%当NAA浓度为0.2mL时平均成苗率最高达96%,当6-BA浓度分别为0.5mg/L和0.2mg/L时，平均成苗率均为95.5%表明6～BA浓度的高低对自由人槭成苗率没有显著的影响。综合各因素得出以顶芽为外植体选用MS培养基添加0.5mg/L或0.2mg/L的6-BA和0.2mg/L的NAA,有利于自由人槭顶芽的成苗。
 

3结论

挪威黄金枫以种子为外植体，0.1%升汞消毒8min,消毒效果最佳，无菌率达100%中毒率为0；自由人槭以顶芽为外植体，0.1%升汞消毒6min,无菌率达95%中毒率为0。挪威黄金枫种子在黑暗条件下，温度在24～26℃时萌发率最高达98%；自由人槭以顶芽为外植体，温度在24～26℃光照3000～5000lx条件下为最适的培养条件，平均萌发率最高达97.5%。选用MS培养基，添加0.5mg/L的GBA和0.2mg/L的NAA有利于挪威黄金枫种子的成苗，平均成苗率在95%以上；自由人槭以顶芽为外植体，选用MS培养基，并添加0.5mg/L或0.2mg/L6-BA,0.2mg/LNAA浓度，成苗率在95%以上。

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